Подбор условий (37)

Влияние температуры на разрешение пиков при ОФ ВЭЖХ хроматографии белковых смесей

Хорошо известно, что увеличение температуры значительно ускоряет массоперенос при хроматограмии. Особенно часто данный прием оптимизациии хроматографического разделения используют в распределительной хроматографии, где массоперенос аналита между хроматографическими фазами зачастую подобен (даже теории такие есть) массопереносу между двумя несмешивающимися (полярной и неполярной) жидкостями, а, следовательно, зависит от температуры наиболее сильно.

Влияние ТФУ на разделение белков при ОФ ВЭЖХ

При обращенно-фазовой ВЭЖ хроматографии белков в качестве модификатора очень часто используется трифторуксусная кислота в концентрациях от 0,05-0,2% по массе.

Зависимость диапазона линейности детектора от условий разделения

UV-детектор является самым распространенным из применямых в хроматографии типом детекторов. Его основные достоинства: широкий спектр детектируемых аналитов, простота эксплуатации и конструкции, возможность использования при градиентном элюировании и широкий линейный диапазон. Линейности эта характеристика детектора, говорящая о том, что зависимость отклика детектора (Y) от количества аналита (Х) может быть описана линейны уравнением (риунок 1).

Использование детектора проводимости при детектировании пика белка

Часто получается так, что в подвижных фазах, используемых при хроматографии белков необходимо использовать компоненты поглощающие на длине волны детектирования.

Изменение времени выхода в зависимости от количества вещества на колонке

Как известно, обязательным условием идентификации вещества в хроматографии является совпадение времени выхода пика с его стандартом.  Иначе или система нестабильна, или вещества в образце нет. Я тоже так думал, но оказывается бывают исключения. Так в нашу лабораторию поступила аналитическая колонка С18, на которой определяют содержание интерферона на разных стадиях его производства. Методика фармакопейная и годами используемая. Откалибровались по стандарту (1 точка)- все идеально. Разброс по площади меньше 1%, колебания времени тоже мизерные.

Удивительное стечение обстоятельств или как два хроматографиста со стажем напрочь угробили хорошую ВЭЖХ колонку

Однажды был какой-то на удивление дурацкий день: у меня 2 раза в моем присутствии при фильтрации забивался фильтр и мигом его срывало к чертовой матери, в результате чего ренатурат капал даже с потолка, еще у одного здорового парня вдруг кровь пошла носом ну и так по мелочи. А еще у одного хроматографиста метод, который он перенес уже на десяток с лишним хроматографов, по непонятным причинам ни как не хотел воспроизводиться на очередном ВЭЖХ-хроматографе.

Тестирование аффинных сорбентов

Аффинная хроматография основана на строго специфическом взаимодействии связанных с сорбентом антител с антигеном. Благодаря этому аффинная хроматография достаточно широко применяется в биотехнологии, т.к. позволяет достаточно легко извлекать минимальные количества целевого вещества из больших объемов, зачастую очень сложных растворов. Но такая специфичность имеет и свою обратную сторону. Так если в катионообменной хроматографии в 90% случаев используют SP или CM Sepharose, то практически для любого белка можно получить несколько аффинных сорбентов с разной емкостью, специфичностью и т.д.

Для чего в практике хроматографии теория?

          Наш сайт называется «Теория и практика хроматографии», но, как я отметил, проработав в нескольких лабораториях/производствах, теория и практика хроматографии, зачастую, «общаются» как достаточно дальние родственники: изредка перезваниваются.

Что делать если на колонку попал воздух

Вопрос достаточно мало рассматриваемый в литературе, но тем не менее очень злободневный в жидкостной хроматографии. Так, например, за прошедший месяц я тем или иным образом сталкивался с этим раза 4. То клапан сработает с запозданием то сам напортачил. Засохшую колонку опять же полежавшую во время жары при +30 в «холодной» комнате пришлось восстанавливать. Работаю на хроматографе без ловушки, так что единичные пузыри бывает залетают.

Радиальная хроматография, зачем она?

     Хроматография довольно консервативная наука, т.к. практически со времен Михаила Семеновича Цвета для хроматографического разделения использовались плоско упакованные сорбенты (тонкослойная хроматография (ТСХ), гель-электрофорез, бумажная хроматография) или сорбенты упакованные в сосуды круглого сечения (колоночная, аксиальная жидкостная и газовая хроматографии). Это обусловлено как историческими, так и практическими аспектами.

Syndicate content