Опыт использования тела хроматографической колонки в качестве петли инжекционного клапана

Ввод пробы через петлю инжекторного клапана в жидклостной хроматографии применяется повсеместно и основан на использовании 7 портового 2-ходового клапана, который в положении "Загрузка" (Load) позволяет вводить пробу в петлю через инжекционный порт (например при помощи шприца) (Рис.1), а в положении "Ввод" (Inject) - включает петлю в тракт хроматографа, за счет чего происходит безопасный ввод пробы(Рис.2).

 

Рисунок 1. Схема соединения портов инжекционного клапана хроматографа при положении "Загрузка"

 

Рисунок 2. Схема соединения портов инжекционного клапана хроматографа при положении "Ввод".

Таким образом максимальный объем вводимой пробы ограничен внутренним объемом капиляра, используемого в качестве петли. Наиболее точным и воспроизводимым способом введения пробы в жидкостной хроматографии является способ при котором для пробы используется весь объем петли хроматографа, т.к. только полное заполнение петли (при загрузке) с последующим полным вымыванием (при Вводе) пробы в жидкостной тракт позволяет избежать большинства инструментальных и человеческих ошибок при вводе пробы. Стоит отметить, что при введении образца в петлю происходит размывание переднего фронта пробы, и чем петля длиннее и/или толще, тем больше происходит размывание и по рекомендациям Pharmacia для 95% заполнения надо вводить не менее 2 объемов петли.

Препаративные хроматографы серии  Akta  стандартно поставляются с петлей объемом 500 мкл, которая представляет собой капиляр из PEEK с внутренним диаметром 0,75 мм и длиной около 113,2 см. В случае необходимости введения пробы большего объема надо самостоятельно делать петлю, но максимальная длина капиляра составляет 2 м и при максимальном внутреннем диаметре в 1 мм объем петли будет 1,57 мл. Конечно капиляры можно объединить, но шприцом вручную продавить такую петлю будет продавить очень сложно. В результате остается или нанесение через насос или, если объем меньше 150 мл использовать SuperLoop . SuperLoop, конечно прекрасное и удобное изобретение, но не дешевое (около 1000 долл) и, потому, не очень распространенное. Поэтому если ее нет необходимо внести чуть больше 1,6 мл образца , то вам надо его разводить раз в 20 (чтобы снизить потери) и наносить через насос. Ну а вот что делать, если разводить не получается (осадок выпадет, белок не стабильный  и т.д.), нет времени ждать и следить за нанесением, ну или (самое частое) - тупо лень :) ?

Вот в такую ситуацию я сам и попал и начал усиленно думать и вспомнил, что еще в замечательной книге, светлой ему памяти, Льва Абрамовича Остермана при помощи длинных трубок узкого диаметра даже градиенты предлагалось создавать и сохранять. Ну градиенты, это, допустим, уже слишком, но почему же просто пустую и длинную колонку не использовать для петли. У меня как раз была такая:TAC05/250LPEO-AB-2 (KronLab) - 25 см длиной и внутренним диаметром 0,5 см. Оба плунжера подвижны? в результате чего внутренний объем может изменяться от 0 до 4,9 мл. Мне, в принципе, больше и не надо. Снял петлю, подключил колонку вместо нее: "верх" на клапан 6, выход с колонки - на клапан 2 (рис. 3).

Рисунок 3. Хроматографическая колонка Kronlab EcoPlus в качестве петли для ввода пробы на хроматографе Akta Purifier 100.

Пока устанавливал, меня все не отпускала мысль, что будет с размыванием наносимого материала, ведь толщина все таки значительная и в случае неламинарности потока может случиться, что при сильном размывании нанести весь материал за разумное время не получиться. Но когда я решил провести CIP установленной петли-колонки при помощи 0,2Н NaOH, то оказалось, что размывание фронтов щелочи практически идентичны размыванию фронтов при пропускании щелочи мимо петли (рис. 4).

Рисунок 4. Хроматограммы проводимости (коричневая) и UV215 (розовая), полученные при пропускании воды-щелочи-воды а) через петлю-колонку (левый пик) и б) мимо петли-колонки (правый пик).

Как видите, достаточно приемлемый результат, во всяком случае я им пользоваться буду, и в первую очередь из-за того, что очень легко регулировать объем, за счет подвижных плунжеров, ну и SuperLoop еще нет, конечно:) Также данную петлю-колонку можно использовать в качестве ловушки для маленьких пузырей, появляющихся в шлангах. Еще одним преимуществом является то, что из-за относительно большого объема этой петли возможна последовательная инжекция малых, значительно меньших объема петли-колонки, объемов пробы. При этом не происходит (ну и не может в принципе) ее критически неприемлимого растворения, как это происходит при инжекции тех же объемов из петлей меньшего размера.

Одно замечание: не стоит забывать, что. при остановке хроматографа инжекторный клапан автоматически переходит в положение "Загрузка", в результате чего такая петля становится открытой с обеих сторон и запросто вытечет. Так что советую шприц не вынимать из инжекторного порта, а лучше еще один полунаполненный шприц навесить на слив петли - 4 порт, тогда можно будет совсем избежать попадания пузырей в петлю.

Вообщем зарнее согласен, что паллиатив, но думаю, что вполне жизнеспособный:)

Желаю всем хорошего настроения, чему, надеюсь, поможет очень хорошая песня "Шелкопряд" (см. архив).

 

Прикрепленный файлРазмер
Шелкопряд_mp3.rar9.24 Мб
Антонина hh аватар

тоже планируем

тоже планируем так сделать.можно вашу электронную почту,есть несколько вопросов

Shurae аватар

а что бы тут

а что бы тут прямо не спросить - вполне возможно, что и другим пригодится

Алексей В аватар

Хотел бы

Хотел бы спросить совета: загрузочная петля на имеющемся приборе на 20 мкл и нет возможности изготовить более вместительную, а требуется загрузить за раз  в 100 раз больше...,в этой связи вопрос в том, возможно ли загрузить через насос требуемый объем пробы, ? не выйдет ли этот излишек в сброс ? Блин..вопросы глупые, но спросить больше некого

Василий аватар

Приезжайте в

Приезжайте в Москву, я дам Вам на время петлю PEK на 2000 мкл.

О пользователе

Василий аватар
User offline. Last seen 3 недели 5 дней ago. Не в сети
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Зарегистрирован(а): 20/05/2009