C18

Определение мертвого объема колонки. Рассмотрение возможности применения ацетонового теста для обращенно-фазных колонок.

У хроматографической колонки существует несколько параметров, которые желательно как контролировать при покупке, так и при подозрении на ее повреждение во время работы. Некоторые из них , такие как: "мертвый объем", качество и эффективность набивки хроматографической колонки - легко можно оценить по форме пика неудерживаемого в используемой хроматографической системе вещества, пропущенного через колонку.

Таким образом используемое вещество должно обладать несколькими важными свойствами:

1. Быть хорошо растворимым в подвижной фазе

2. Уверенно регистрироваться детектором

К чему ведет выбор сорбента с неподходящей пористостью при обращенно-фазовой хроматографии белков

Обращенно-фазовая хроматография, наверное, самый распространенный метод колличественного и качественного определения белков в сложных системах, а также самый оптимальный, по соотношению выход/степень очистки, метод препаративного и промышленного получения высокоочищенных (более 90%) белков. Но для достижения эффективности и воспроизводимости получаемых данных необходимо провести ряд обязательных дополнительных исследований. Одним из которых является правильный подбор неподвижной фазы.

Влияние температуры на разрешение пиков при ОФ ВЭЖХ хроматографии белковых смесей

Хорошо известно, что увеличение температуры значительно ускоряет массоперенос при хроматограмии. Особенно часто данный прием оптимизациии хроматографического разделения используют в распределительной хроматографии, где массоперенос аналита между хроматографическими фазами зачастую подобен (даже теории такие есть) массопереносу между двумя несмешивающимися (полярной и неполярной) жидкостями, а, следовательно, зависит от температуры наиболее сильно.

Влияние ТФУ на разделение белков при ОФ ВЭЖХ

При обращенно-фазовой ВЭЖ хроматографии белков в качестве модификатора очень часто используется трифторуксусная кислота в концентрациях от 0,05-0,2% по массе.

RSS-материал