Про тестирование необходимость тестирования сорбентов и сложности, связанные с этим процессом я писал уже несколько раз. В настоящей же краткой записи я хочу обратить Ваше внимание на серию статей, написанной представителями компании Novo Nordisk и опубликованной в 2000-2007 г.г. в "Journal of Chromatography A".

Мое повышенное внимание именно к данным статьям обусловлено тем, что:

Недавно задали вопрос: как оценить эффективность хроматографической системы при гель-проникающей хроматографии и что делать если эффективность, определяемая так же как и в паспорте, не соответствует (значительно ниже) заявленной.

В предыдущем посте я много писал про подбор условий. Так вот, понятно, что подбирать можно все что угодно, но, считаю, что первоначально необходимо провести скрининг именно неподвижной фазы - сорбентов. Да и в практике достаточно часты частные случаи, когда по разным причинам (прекращение выпуска используемого сорбента, перебои с поставками, значительные различия характеристик от партии к партии, дороговизна и т.д.) приходится подбирать сорбент под существующую технологию.

Разработка любого хроматографического (аналитического или препаративного по цели) метода требует значительных временных и материальных затрат в связи с тем, что зачастую необходимо найти оптимальное соотношение множества значимых факторов: дешевизна, временные затраты, воспроизводимость, чувствительность, потери и т.д. и т.п. В результате необходимо провести большой объем экспериментальной работы как на этапе предварительного выбора оптимальных и/или отсева совсем неподходящих условий , так и на стадии отладки окончательной доводки методики.

Хорошо известно, что увеличение температуры значительно ускоряет массоперенос при хроматограмии. Особенно часто данный прием оптимизациии хроматографического разделения используют в распределительной хроматографии, где массоперенос аналита между хроматографическими фазами зачастую подобен (даже теории такие есть) массопереносу между двумя несмешивающимися (полярной и неполярной) жидкостями, а, следовательно, зависит от температуры наиболее сильно.

При обращенно-фазовой ВЭЖ хроматографии белков в качестве модификатора очень часто используется трифторуксусная кислота в концентрациях от 0,05-0,2% по массе.

Аффинная хроматография основана на строго специфическом взаимодействии связанных с сорбентом антител с антигеном. Благодаря этому аффинная хроматография достаточно широко применяется в биотехнологии, т.к. позволяет достаточно легко извлекать минимальные количества целевого вещества из больших объемов, зачастую очень сложных растворов. Но такая специфичность имеет и свою обратную сторону. Так если в катионообменной хроматографии в 90% случаев используют SP или CM Sepharose, то практически для любого белка можно получить несколько аффинных сорбентов с разной емкостью, специфичностью и т.д.

          Наш сайт называется «Теория и практика хроматографии», но, как я отметил, проработав в нескольких лабораториях/производствах, теория и практика хроматографии, зачастую, «общаются» как достаточно дальние родственники: изредка перезваниваются.

У Unicorn есть функция, позволяющая установить верхний предел давления и в дальнейшем, если давление на колонке привысит установленное значение, то будет снижаться поток, при котором давление будет постоянным. Функция просто замечательная, т.к. при нанесении, особенно первичного материала (культуральная жидкость, раствор гибридного белка и т.д.)

Продолжаю отвечать на вопросы, хотя остаюсь при своем мнении, выраженном вчера, о необходимости использовать для вопросов форум на нашем сайте, где вести обсуждение заведомо удобнее.

Итак, от пользователя Nicolya поступило письмо следующего содержания:

"Здравствуйте, уважаемые.