Varian

Проблемы с газовым хроматографом Varian: еще один ответ написьмо

Продолжаю отвечать на вопросы, хотя остаюсь при своем мнении, выраженном вчера, о необходимости использовать для вопросов форум на нашем сайте, где вести обсуждение заведомо удобнее.

Итак, от пользователя Nicolya поступило письмо следующего содержания:

"Здравствуйте, уважаемые.

Ацетоновый тест на ВЭЖХ хроматографе Varian

Начав работать на Varian'е я столкнулся с тем, что у меня плавали площади пиков на ProStar PL-ELSD 2100, лазерном детекторе, и я ни как не мог понять в чем дело, то ли методическая ошибка, то ли еще что (у него еще отклик не линейный). И тогда я решил проверить точность вкола. Самым простым способом является ацетоновый тест, но лазерный детектор ацетон не "видит", к тому же было подозрение, что на диольной колонке он будет задерживаться. Мне помогло то, что у меня после колонки стоит УФ-детектор, который, как известно отличается линейностью отклика, а также прекрасно детектирующий ацетон на 280нм.

Причины отсутствия сигнала на свето-рассеивающем детекторе ф.Varian. ч.2

Хорошие новости!

Не прошло и 1 дня, после отправки письма в Varian, мне позвонил замечательный молодой человек имы с ним замечательно поговорили.

Как и ожидалось в log-файлах ошибок не было (ошибок-то прибор не выдавал ), так-что он предположил методическую ошибку (т.е. непредвиденную работу прибора в этой буферной системе с конкретно этим типом веществ), при которой в определенный момент "что-то там засоряется".

Вполне логично.

Предложил выход: оказывается, буржуи советуют начинать с минимальных температур (градусов с 30) и максимального потока газа (3-4л), а потом постепенно увеличивать температуру и понижать скорость газа.

Причины отсутствия сигнала на свето-рассеивающем детекторе ф.Varian

Я занимаюсь определением фосфолипидного состава на приведенном выше оборудовании и использую фазы: 100% Гексан - 55%iPS 40%Hex 4,5%H20 AcNH4 и периодически начал замечать пропажу сигнала на ELSD. Это может быть из-за:

1. Отсутствия промывочной жидкости в автосэмплере (использую 80% метанол)

2. Из выходного патрубка детектора начинает капать элюент и где-то через 1-2 часа - хроматограмма пустая, только профиль градиента.

Определение витаминов

Пробоподготовка при определении жирорастворимых витаминов в плазме крови.

 

В эппендорф берется 300 мкл. плазмы крови, смешивается с 300 мкл. этанола и 300 мкл. гексана.

Полученная смесь интенсивно встряхивается на вортексе в течение 1 мин., затем центрифугируется 3 мин. при 3000 об./мин. Супернатант отделяется. Операция повторяется не менее 3 раз.

Полученные гексановые вытяжки объединяются и упариваются в токе азота или под вакуумом при Т не более 400С.

Недостатки ПО Galaxie, для ВЭЖХ системы фирмы Varian? ч.2

Прибор: жидкостной хроматограф фирмы Varian в составе: автосемплер - ProStar 430; насосы – ProStar 210; UV-детектор  – ProStar 325; испаряющий светорассеивающий детектор – ProStar PL-ELSD 2100.
Колонка Monochrom Diol 3μ 100×2.0 mm.
Программа: Galaxie Chromatography Workstation версия 1.9.3.2.

Недостатки ПО Galaxie, для ВЭЖХ системы фирмы Varian

При проведении анализа иногда, безо всякого сообщения происходит прекращение записи сигнала с одного детектора, на рис.1 запись идет с UV-детектора (верхняя хроматограмма), а ELSD - моего основного (нижняя хроматограмма), не идет :

Syndicate content