хроматограф. разделение

Лучшая серия статей о тестировании ионообменных сорбентов, используемых при хроматографической очистке белков

Про тестирование необходимость тестирования сорбентов и сложности, связанные с этим процессом я писал уже несколько раз. В настоящей же краткой записи я хочу обратить Ваше внимание на серию статей, написанной представителями компании Novo Nordisk и опубликованной в 2000-2007 г.г. в "Journal of Chromatography A".

Мое повышенное внимание именно к данным статьям обусловлено тем, что:

Воспроизведение новой метоики или еще раз про уравновешивание

Всем здравствуйте! Давно не брал я в руки "шашки", а тут что то "занесло" и, знаете, на такой ерунде, что решил написать.

Система BufferPrep для скрининга условий хроматографического разделения в Unicorn

Разработка любого хроматографического (аналитического или препаративного по цели) метода требует значительных временных и материальных затрат в связи с тем, что зачастую необходимо найти оптимальное соотношение множества значимых факторов: дешевизна, временные затраты, воспроизводимость, чувствительность, потери и т.д. и т.п. В результате необходимо провести большой объем экспериментальной работы как на этапе предварительного выбора оптимальных и/или отсева совсем неподходящих условий , так и на стадии отладки окончательной доводки методики.

Особенности проведения ВЭЖХ анализа на колонках с "мягкими" сорбентами

В аналитической хроматографии довольно широко распростраены методы, в которых используются хроматографические колонки с "мягкими" сорбентами. Это, в основном, сорбенты на основе сверхсшитых природных углеводных полимеров декстрана, агарозы и т.д., выпускаемые под марками Sepharose, Superdex, Sephadex и т.д.

Определение мертвого объема колонки. Рассмотрение возможности применения ацетонового теста для обращенно-фазных колонок.

У хроматографической колонки существует несколько параметров, которые желательно как контролировать при покупке, так и при подозрении на ее повреждение во время работы. Некоторые из них , такие как: "мертвый объем", качество и эффективность набивки хроматографической колонки - легко можно оценить по форме пика неудерживаемого в используемой хроматографической системе вещества, пропущенного через колонку.

Таким образом используемое вещество должно обладать несколькими важными свойствами:

1. Быть хорошо растворимым в подвижной фазе

2. Уверенно регистрироваться детектором

К чему ведет выбор сорбента с неподходящей пористостью при обращенно-фазовой хроматографии белков

Обращенно-фазовая хроматография, наверное, самый распространенный метод колличественного и качественного определения белков в сложных системах, а также самый оптимальный, по соотношению выход/степень очистки, метод препаративного и промышленного получения высокоочищенных (более 90%) белков. Но для достижения эффективности и воспроизводимости получаемых данных необходимо провести ряд обязательных дополнительных исследований. Одним из которых является правильный подбор неподвижной фазы.

Влияние ТФУ на разделение белков при ОФ ВЭЖХ

При обращенно-фазовой ВЭЖ хроматографии белков в качестве модификатора очень часто используется трифторуксусная кислота в концентрациях от 0,05-0,2% по массе.

Зависимость диапазона линейности детектора от условий разделения

UV-детектор является самым распространенным из применямых в хроматографии типом детекторов. Его основные достоинства: широкий спектр детектируемых аналитов, простота эксплуатации и конструкции, возможность использования при градиентном элюировании и широкий линейный диапазон. Линейности эта характеристика детектора, говорящая о том, что зависимость отклика детектора (Y) от количества аналита (Х) может быть описана линейны уравнением (риунок 1).

Использование детектора проводимости при детектировании пика белка

Часто получается так, что в подвижных фазах, используемых при хроматографии белков необходимо использовать компоненты поглощающие на длине волны детектирования.

Изменение времени выхода в зависимости от количества вещества на колонке

Как известно, обязательным условием идентификации вещества в хроматографии является совпадение времени выхода пика с его стандартом.  Иначе или система нестабильна, или вещества в образце нет. Я тоже так думал, но оказывается бывают исключения. Так в нашу лабораторию поступила аналитическая колонка С18, на которой определяют содержание интерферона на разных стадиях его производства. Методика фармакопейная и годами используемая. Откалибровались по стандарту (1 точка)- все идеально. Разброс по площади меньше 1%, колебания времени тоже мизерные.

RSS-материал