Выбор колонки

При выборе колонки чаще всего поступают следующим образом:

Испытывают имеющуюся в распоряжении колонку;

Обращаются за советом к коллегам;

Проводят литературный поиск.

Для оптимизации  хроматографического разделения проводят тщательный анализ полученных результатов и следуют нескольким проверенным практикой правилам:

Пики анализируемого компонента не разрешены (нет разделения).

Выбрать более длинную колонку или колонку с меньшим внутренним диаметром. При этом увеличивается селективность. Если использовалась колонка максимально возможной длины или минимально возможного диаметра, единственным решением является замена фазы, что позволит изменить селективность.

Слишком хорошее хроматографической колонки. Такая зависимость может быть выражена формулой
R = 1/4 * (a-1)/a * k'2/(k'2 + 1) * N^1/2
где k'2 - фактор емкости второго хроматографического пика.
Как следует из этой зависимости, разрешение в общем случае зависит от трех параметров – селективности a, удерживания k' и эффективности N; чем больше их значения, тем лучше разрешение.
Увеличение параметра N (см. эффективность) на практике означает замену имеющейся колонки на более эффективную. При этом следует помнить, что разрешение пропорционально квадратному корню из эффективности, то есть для улучшения разделения в два раза требуется колонка, в четыре раза более эффективная, чем данная.
Как правило, чем больше удерживание пары пиков (больше значение k'2), тем лучше она разделяется. Практически увеличения удерживания добиваются путем уменьшения концентрации полярной добавки (в НФ ВЭЖХ) или модификатора (в ОФ ВЭЖХ) в элюенте.
Два упомянутых выше способа являются скорее «экстенсивными», и способны лишь отчасти улучшить разрешение. На практике они могут применяться, к примеру, при воспроизведении стандартных методик на местах.
Значительного увеличения разрешения можно достигнуть лишь путем регулирования селективности a. Изменения селективности можно добиться, заменив неподвижную фазу или изменив состав элюента.
">разрешение

(признак неопытности исследователя).

Выбрать колонку меньшей длины или большего внутреннего диаметра или колонку с менее толстой пленкой НФ. Оптимизация анализа необходима, поскольку в противном случае продолжительность анализа будет неоправданно велика. Помните о том, что основным достоинством кварцевых капиллярных колонок является возможность их разрезания на отрезки любой длины.

Плохая форма пика.

Если колонка установлена правильно и прибор исправен, то плохая форма пика может быть обусловлена одной из нижеперечисленных причин или их совокупностью:

Компонент пробы не сочетается с неподвижной фазой колонки. Попробуйте использовать другую фазу. Помните, что «подобное растворяется в подобном». Поэтому для разделения полярных компонентов пробы следует использовать полярные фазы.

Колонка может быть предназначена для целей, отличных от решения вашей задачи. Следует связаться с поставщиком, изучить спецификацию для данной колонки и сделать вывод, подходит ли она в принципе для решения поставленной задачи.

Возможно, что концентрация компонентов пробы слишком велика и толщина пленки НФ недостаточна. Необходимо снизить нагрузку на колонку или перейти к более толстым пленкам НФ.

Чрезмерный унос фазы при высокой температуре.

Использовать колонки с более тонкими пленками сшитой НФ. При выборе оптимальной колонки для разделения важно учитывать следующие характеристики колонки:

-эффективность (число теоретических тарелок/м колонки);

-значение коэффициента емкости k (мера воспроизводимости толщины пленки);

-значение индексов удерживания (характеристика химической природы колонки);

-значение высот пиков оснований/кислот (мера инертности колонки);

-унос фазы (мера термической стабильности колонки).

Сравнение средней эффективности колонок с различными внутренним диаметром и типом фаз. Приведены число тарелок/м и

эффективность нанесения, %

Внутренний диаметр, мм

Метилсиликоновая фаза (неполярная)

Фаза, содержащая 50% фенильных групп (средней полярности)

Карбовакс 20 М (полярная)

0,1

0,2

0,32

0,53

10000/90%

4500/90%

3200/90%

1500/75%

--

4200/80%

3000/80%

1350/60%

--

4000/70%

2500/70%

1300/60%

Самые важные показатели работы колонки:

Эффективность;

Количество эффективных теоретических тарелок (изотермические условия);

Разрешение;

Число разделений (режим программирования температуры);

Активность;

Определение симметричного пика;

Изменение высоты пика (например, отношение высот пиков основания и кислоты);

Воспроизводимость от колонки к колонке;

Изменение индекса удерживания;

Изменение k

Если ухудшилось качество колонки за счет накопления в ней нелетучих веществ, содержащихся в пробе, можно рекомендовать следующее:

Отрезать часть колонки (1-2 м) с той стороны, с которой вводится проба;

Перевернуть колонку и провести повторное кондиционирование в течение ночи;

Промыть колонку. Промывка колонки – это крайняя мера. Как правило, после промывки регенерируется тоько 50% колонок. Таким образом, используя этот метод, можно вообще потерять колонку

К хранению колонок предъявляются два основных требования:

Следует избегать повреждения колонок. Наличие небольшой царапины или трещины может привести к тому, что при нагревании колонка сломается в месте повреждения;

Необходимо герметично закрывать концы колонки, чтобы защитить жидкую фазу от попадания кислорода и загрязнения

Тенденции в развитии капиллярных кварцевых колонок

Использование более коротких колонок с меньшим внутренним диаметром. Такие колонки позволяют достичь чрезвычайно высокой эффективности и проводить сверхскоростные определения

Применение PLOT-колонок в капиллярной газоадсорбционной хроматографии

Использование высокотемпературных жидких фаз и внешних покрытий

Внедрение смешанных или специально приготовленных фаз для проведения специфических разделений

О пользователе

Kreativka's picture
User offline. Last seen 1 year 1 week ago. Offline
Друг сайта



Настоящее имя Катя

Пол женский

Дата рождения 10/08/1987



Joined: 16/01/2012