Блог пользователя Василий

Определение качества упаковки гель-фильтрационных колонок с сорбентами на основе силикагеля и сверхсшитой агарозы

Аналитическая гель-эксклюзивная хроматография (size exclusion chromatography) очень широко распространенный метод для качественного и колличественного анализа состава сложных смесей различного происхождения. Как известно гель-фильтрация основана на распределении молекул аналита по их размерам и принципиально отличается от всех остальных видов хроматографий тем, что аналит не сорбируется (не должен) на сорбенте, т.к. распределение молекул происходит во время их движения сквозь слой пористого сорбента.

Chromeleon 7.1: уверенный шаг назад

Про Chromeleon я писал уже не раз (тут и тут, например). Вообщем, пока для меня это эталон управляющей программы и лучше мне не нужно, т.к. пока ни разу не вcтречался ни с одной проблемой, которую нельзя бы было решить средствами данной программы, но возможно тут дело и в отсутствии опыта.

Вообщем, завлеченный красивыми презентационными видео-роликами я, при установку Dionex Ultimate 3000 попросил установить Chromeleon 7.1, а не 6.8 (можно было выбирать). Кратко резюмирую: зря.

Определение мертвого объема колонки. Рассмотрение возможности применения ацетонового теста для обращенно-фазных колонок.

У хроматографической колонки существует несколько параметров, которые желательно как контролировать при покупке, так и при подозрении на ее повреждение во время работы. Некоторые из них , такие как: "мертвый объем", качество и эффективность набивки хроматографической колонки - легко можно оценить по форме пика неудерживаемого в используемой хроматографической системе вещества, пропущенного через колонку.

Таким образом используемое вещество должно обладать несколькими важными свойствами:

1. Быть хорошо растворимым в подвижной фазе

2. Уверенно регистрироваться детектором

К чему ведет выбор сорбента с неподходящей пористостью при обращенно-фазовой хроматографии белков

Обращенно-фазовая хроматография, наверное, самый распространенный метод колличественного и качественного определения белков в сложных системах, а также самый оптимальный, по соотношению выход/степень очистки, метод препаративного и промышленного получения высокоочищенных (более 90%) белков. Но для достижения эффективности и воспроизводимости получаемых данных необходимо провести ряд обязательных дополнительных исследований. Одним из которых является правильный подбор неподвижной фазы.

Влияние температуры на разрешение пиков при ОФ ВЭЖХ хроматографии белковых смесей

Хорошо известно, что увеличение температуры значительно ускоряет массоперенос при хроматограмии. Особенно часто данный прием оптимизациии хроматографического разделения используют в распределительной хроматографии, где массоперенос аналита между хроматографическими фазами зачастую подобен (даже теории такие есть) массопереносу между двумя несмешивающимися (полярной и неполярной) жидкостями, а, следовательно, зависит от температуры наиболее сильно.

Влияние ТФУ на разделение белков при ОФ ВЭЖХ

При обращенно-фазовой ВЭЖ хроматографии белков в качестве модификатора очень часто используется трифторуксусная кислота в концентрациях от 0,05-0,2% по массе.

Особенности упаковки FPLC колонок на примере колонок серий ХК и HiScale

В настоящее время при разработке технологий и пилотном производстве фармпрепаратов на основе белков активно используется технология FPLC, основанная на использовании сорбентов, матрица, которых состоит из сверхсшитых полимеров природного или искусственного происхождения. Данные сорбенты за счет своей относительно жесткой и ажурной структуры создают очень низкое сопротивление даже вязким белковым растворам при высоких (зачастую более 300 см/час) и обладают очень высокой емкостью (от 20 до 100 и более мг белка/мл сорбента).

Зависимость диапазона линейности детектора от условий разделения

UV-детектор является самым распространенным из применямых в хроматографии типом детекторов. Его основные достоинства: широкий спектр детектируемых аналитов, простота эксплуатации и конструкции, возможность использования при градиентном элюировании и широкий линейный диапазон. Линейности эта характеристика детектора, говорящая о том, что зависимость отклика детектора (Y) от количества аналита (Х) может быть описана линейны уравнением (риунок 1).

Использование детектора проводимости при детектировании пика белка

Часто получается так, что в подвижных фазах, используемых при хроматографии белков необходимо использовать компоненты поглощающие на длине волны детектирования.

Изменение времени выхода в зависимости от количества вещества на колонке

Как известно, обязательным условием идентификации вещества в хроматографии является совпадение времени выхода пика с его стандартом.  Иначе или система нестабильна, или вещества в образце нет. Я тоже так думал, но оказывается бывают исключения. Так в нашу лабораторию поступила аналитическая колонка С18, на которой определяют содержание интерферона на разных стадиях его производства. Методика фармакопейная и годами используемая. Откалибровались по стандарту (1 точка)- все идеально. Разброс по площади меньше 1%, колебания времени тоже мизерные.

RSS-материал

О пользователе

Василий аватар
User offline. Last seen 3 недели 5 дней ago. Не в сети
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Зарегистрирован(а): 20/05/2009