Про тестирование необходимость тестирования сорбентов и сложности, связанные с этим процессом я писал уже несколько раз. В настоящей же краткой записи я хочу обратить Ваше внимание на серию статей, написанной представителями компании Novo Nordisk и опубликованной в 2000-2007 г.г. в "Journal of Chromatography A".
Мое повышенное внимание именно к данным статьям обусловлено тем, что:
Недавно задали вопрос: как оценить эффективность хроматографической системы при гель-проникающей хроматографии и что делать если эффективность, определяемая так же как и в паспорте, не соответствует (значительно ниже) заявленной.
Всем здравствуйте! Давно не брал я в руки "шашки", а тут что то "занесло" и, знаете, на такой ерунде, что решил написать.
Не секрет, что современное хроматографическое оборудование, отвечающее широкому спектру различных задач, поставленных сегодняшним днем, является далеко не дешевым «удовольствием» для компаний и лабораторий. Непрогнозируемая политическая ситуация в нашей стране вкупе с непрозрачностью и скудностью финансирования научно- исследовательских организаций, а также повсеместное «кумовство» лишают лаборантов доступа к совершенной и актуальной для текущих дел аппаратуре.
В биотехнологии, особенно при производстве вакцин, широко используется гель-проникающая хроматография, причем как в производственном процессе, так и при контроле качества. При этом вакцинные препараты, зачастую, гетерогенны по своему составу и имеют достаточно широкий диапазон молекулярных масс, что влечет необходимость использования крупнопористых гель-фильтрационных сорбентов с пределом эксклюзии в несколько мегадальтон. Сколько точно, ососбо даже не важно: главное, что больше 2МДа! Почему? Да потому что в широком доступе, для определения V0, есть только Blue Dextran с такой Mr!
Я не знаю как добавить ее в раздел книги и методики, поэтому я ее поместила сюда
В предыдущем посте я много писал про подбор условий. Так вот, понятно, что подбирать можно все что угодно, но, считаю, что первоначально необходимо провести скрининг именно неподвижной фазы - сорбентов. Да и в практике достаточно часты частные случаи, когда по разным причинам (прекращение выпуска используемого сорбента, перебои с поставками, значительные различия характеристик от партии к партии, дороговизна и т.д.) приходится подбирать сорбент под существующую технологию.
Разработка любого хроматографического (аналитического или препаративного по цели) метода требует значительных временных и материальных затрат в связи с тем, что зачастую необходимо найти оптимальное соотношение множества значимых факторов: дешевизна, временные затраты, воспроизводимость, чувствительность, потери и т.д. и т.п. В результате необходимо провести большой объем экспериментальной работы как на этапе предварительного выбора оптимальных и/или отсева совсем неподходящих условий , так и на стадии отладки окончательной доводки методики.
Использование средств автоматизации в хроматографии, как и в любой другой прикладной области науки и техники, позволяет, зачастую, значительно улучшить как показатели самого, автоматизируемого процесса, так и общие производственные показатели лаборатории, цеха и т.д. Но cам процесс перехода на автоматизацию, даже, казалось бы, не значительную, требует как временных, так и материальных затрат, а иногда и привести к поломкам или выходу из строя.
Ввод пробы через петлю инжекторного клапана в жидклостной хроматографии применяется повсеместно и основан на использовании 7 портового 2-ходового клапана, который в положении "Загрузка" (Load) позволяет вводить пробу в петлю через инжекционный порт (например при помощи шприца) (Рис.1), а в положении "Ввод" (Inject) - включает петлю в тракт хроматографа, за счет чего происходит безопасный ввод пробы(Рис.2).
Воспроизводимость очень важна в любом хроматографическом разделении, но особенно важна воспроизводимость в производственной хроматографии. Это обусловлено тем, что если в аналитическом разделении цена невоспроизведенной хроматографии незначительна и, зачастую, равна стоимости затраченного рабочего времени, то при производстве невоспроизведение технологии процесса может привести к потере всей серии производимого продукта, что повлечет за собой не только потерю времени, но и значительные (до нескольких десятков и даже сотен тысяч долларов) материальные потери.
Хотелось бы рекомендовать "КУРСЫ по жидкостной хроматографии, валидиции и разработке методик с применением ВЭЖХ" под руководством Константина Сычева.
Много полезного и интересного найдут для себя специалисты любого уровня:
- основы качественного и количественного анализа;
- основы работы на приборе;
- воспроизведение хроматографического разделения;
- оптимизация хроматографического разделения;
- валидация методики с применением ВЭЖХ;
- разработка хроматографической методики;
- выбор типа и размера ВЭЖХ колонки, состава ПФ;
В аналитической хроматографии довольно широко распростраены методы, в которых используются хроматографические колонки с "мягкими" сорбентами. Это, в основном, сорбенты на основе сверхсшитых природных углеводных полимеров декстрана, агарозы и т.д., выпускаемые под марками Sepharose, Superdex, Sephadex и т.д.
Аналитическая гель-эксклюзивная хроматография (size exclusion chromatography) очень широко распространенный метод для качественного и колличественного анализа состава сложных смесей различного происхождения. Как известно гель-фильтрация основана на распределении молекул аналита по их размерам и принципиально отличается от всех остальных видов хроматографий тем, что аналит не сорбируется (не должен) на сорбенте, т.к. распределение молекул происходит во время их движения сквозь слой пористого сорбента.
Про Chromeleon я писал уже не раз (тут и тут, например). Вообщем, пока для меня это эталон управляющей программы и лучше мне не нужно, т.к. пока ни разу не вcтречался ни с одной проблемой, которую нельзя бы было решить средствами данной программы, но возможно тут дело и в отсутствии опыта.
Вообщем, завлеченный красивыми презентационными видео-роликами я, при установку Dionex Ultimate 3000 попросил установить Chromeleon 7.1, а не 6.8 (можно было выбирать). Кратко резюмирую: зря.
Уважаемые господа!
С 12 по 14 апреля 2016 года в Москве, в КВЦ «Сокольники» состоится международная выставка крупнейшая в России по количеству участников выставка лабораторного оборудования и химических реактивов.