Анализ нитрозаминов в лекарствах

Нитрозамины в лекарственных препаратах контролируют как генотоксичные примеси, причем некоторые из этих соединений относят к вероятным канцерогенам для человека. В цитируемом обзоре речь идет об их обнаружении в препаратах трех фармакологических групп, для анализа которых используют экстрагирование проб, высокоэффективную жидкостную и газовую хроматографию с масс-спектрометрическим детектированием.

Почему в фармацевтической отрасли жестко контролируют нитрозамины

N-нитрозамины способны образовываться на разных этапах производства и обращения лекарства, начиная с синтеза фармацевтической субстанции и заканчивая хранением готового препарата. В материале metrohm.com контроль нитрита и нитрозаминов объясняют необходимостью отслеживания следовых количеств примесей в фармацевтических образцах.

После обнаружения N-нитрозаминов в фармацевтических продуктах начались международные расследования причин их появления, пишет pharmjournal.ru. Специалисты изучают возможные пути образования примесей на всех стадиях и разрабатывают меры, снижающие риск их присутствия в готовом лекарственном препарате. Кроме того, оценивается механизм токсического воздействия этих соединений на организм человека.

Как лаборатории подготавливают пробы лекарственных препаратов к анализу

В обзоре pharmjournal.ru рассматривается обнаружение нитрозаминов в препаратах трех фармакологических групп — антагонистах рецепторов ангиотензина II, антагонистах H1-гистаминовых рецепторов и синтетических сахароснижающих средствах. При исследовании таких препаратов лаборатории извлекают целевые соединения из различных лекарственных матриц, от состава которых зависит порядок пробоподготовки.

Сначала из матрицы препарата селективно извлекают N-нитрозамины. Описанные способы экстрагирования помогают отделить целевые аналиты от других компонентов лекарства еще до подачи пробы в хроматографическую систему, уменьшить загрязнение колонки и обеспечить воспроизводимость измерений.

Полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС). От селективности извлечения зависит, какая часть посторонних компонентов окажется в пробе и будет влиять на формирование матричного эффекта при исследовании лекарственного препарата.

Жидкостная хроматография и тандемная масс-спектрометрия обнаруживают следовые концентрации примесей

Высокоэффективная жидкостная хроматография вместе с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) разделяет составляющие сложной смеси и распознает целевые молекулы. С помощью такого анализа можно фиксировать следовые концентрации нитрозаминов в случаях, когда одновременно нужны эффективное разделение компонентов и точная идентификация соединения.

Хроматографическая часть метода разделяет вещества, содержащиеся в лекарственном препарате, а тандемная масс-спектрометрия подтверждает, что обнаруженный компонент относится к целевому нитрозамину. Две последовательные стадии помогают выделять искомые соединения среди компонентов сложной смеси и определять их содержание на заданном уровне.

Высокоэффективную жидкостную хроматографию и газовую хроматографию с масс-спектрометрическим детектором считают «золотым стандартом» определения таких примесей, пишет pharmjournal.ru. От выбранного хроматографического подхода зависит способ разделения смеси, тогда как масс-спектрометрический детектор идентифицирует соединение после завершения разделения.

Чем ЖХ-МС/МС отличается от газовой и ионной хроматографии

Жидкостную хроматографию с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС) используют для непосредственного определения концентрации нитрозаминов. При работе с термолабильными соединениями жидкостный метод помогает обойтись без нагрева, который требуется при газохроматографическом разделении, при этом селективность и предел обнаружения определяются конкретной методикой. Такое различие учитывают при выборе аналитической схемы для веществ, чувствительных к воздействию высокой температуры. ЖХ-МС/МС показывает результат по целевому загрязнителю, а не только по соединениям, способным участвовать в его образовании.

Ионная хроматография (ИХ) предназначена для другой задачи и выявляет следовые количества нитрита, выступающего предшественником нитрозаминов. Metrohm.com считает ИХ подходящим методом такого анализа фармацевтических образцов. Контроль нитрита помогает оценить риск реакции, так как в кислой среде вторичные или третичные амины могут вступать с ним во взаимодействие, образуя нитрозамины. Таким образом, ИХ определяет содержание предшественника, а ЖХ-МС/МС измеряет концентрацию нитрозаминов, которые уже образовались.

Как матричный эффект искажает результаты измерений и меняет работу аналитиков

Составляющие лекарственной матрицы меняют степень ионизации нитрозаминов в масс-спектрометре, влияя тем самым на интенсивность аналитического сигнала. В результате рассчитанная концентрация может не совпасть с фактической, хотя прибор при этом стабильно регистрирует целевое соединение.

Чтобы компенсировать матричный эффект, в методиках ЖХ-МС/МС могут использовать изотопно-меченый внутренний стандарт. Его вводят в пробу лекарства перед масс-спектрометрическим анализом, после чего концентрацию нитрозамина определяют по соотношению сигналов аналита и стандарта, проходящих одинаковую пробоподготовку и подвергающихся воздействию одной матрицы.

Матричный эффект влияет как на подготовку лекарственных проб, так и на обработку полученных результатов измерений. Аналитики контролируют поведение внутреннего стандарта в каждой пробе, ведь его сигнал отражает, насколько состав исследуемого препарата изменил ионизацию определяемого нитрозамина.

Лаборатории развивают стандарты контроля примесей

Выявление N-нитрозодиметиламина (НДМА) в валсартане послужило основанием для расширения лабораторного контроля. По данным metrohm.com, впоследствии примеси нитрозаминов обнаружили и во многих других препаратах. Испытательные центры пересматривают методические регламенты и добавляют определение этих соединений в программы контроля лекарственных средств.

Валидация методики определения нитрозаминов показывает, что вся измерительная процедура подходит для решения поставленной задачи. Лаборатория оценивает подготовку пробы, хроматографическое разделение, регистрацию сигнала и обработку результата в составе единой аналитической цепочки. Такой порядок работы позволяет обнаруживать неподтвержденную чистоту серии до выпуска, а также уменьшает вероятность последующего отзыва препарата из обращения.

В обзоре pharmjournal.ru говорится о необходимости разработки собственных российских стандартов, регулирующих чистоту лекарственных средств. Нормативная база должна устанавливать общие требования к контролю примесей и валидации используемых методик. Регулярный анализ помогает обнаружить загрязнение до появления серии на рынке и принять решение на основании измерений, проведенных по установленной процедуре.