В предыдущем посте я много писал про подбор условий. Так вот, понятно, что подбирать можно все что угодно, но, считаю, что первоначально необходимо провести скрининг именно неподвижной фазы - сорбентов. Да и в практике достаточно часты частные случаи, когда по разным причинам (прекращение выпуска используемого сорбента, перебои с поставками, значительные различия характеристик от партии к партии, дороговизна и т.д.) приходится подбирать сорбент под существующую технологию.
Хотелось бы рекомендовать "КУРСЫ по жидкостной хроматографии, валидиции и разработке методик с применением ВЭЖХ" под руководством Константина Сычева.
Много полезного и интересного найдут для себя специалисты любого уровня:
- основы качественного и количественного анализа;
- основы работы на приборе;
- воспроизведение хроматографического разделения;
- оптимизация хроматографического разделения;
- валидация методики с применением ВЭЖХ;
- разработка хроматографической методики;
- выбор типа и размера ВЭЖХ колонки, состава ПФ;
Наш сайт называется «Теория и практика хроматографии», но, как я отметил, проработав в нескольких лабораториях/производствах, теория и практика хроматографии, зачастую, «общаются» как достаточно дальние родственники: изредка перезваниваются.
Метод аналитической ВЭЖХ применяется в основном для определения качественного и количественного состава аналита. Достижение этих целей достигается калибровкой прибора путем заблаговременного проведения хроматографического анализа раствора одного стандарта или смеси стандартов анализируемых веществ. При правильной настройке хроматографической системы после калибровки вы можете в ручную, или автоматически определить качественный и количественный состав аналита.
Привожу один (точнее один цикл) из немногих обучающих роликов в Youtube на русском языке, что, конечно, очень удручает, т.к., например, на испанском их тьма-тьмущая, не говоря уже про английский. Данный цикл я советовал-бы посмотреть тем, кто хочет, наконец-то понять, что это такое и для чего хроматография нужна, а также для освежения знаний по теории и истории хроматографии.
Курс хроматографии, лекция 1, часть 1
Колонка – сердце любого хроматографического процесса, т.к. вокруг нее все крутиться и если с ней что-нибудь не так, то и толку, ясное дело, не будет. Но как ее проконтролировать?
Хроматограф – это прежде всего сложнейший и дорогущий инструмент.
Извините, что пишу в таком наставительном тоне, но это очень важно понимать и помнить постоянно. К сожалению, понимают далеко не все и я тоже не был исключением, поэтому и пишу.
Очень подробно показано приготовление градиентного SDS-ПААГ, применяемого для разделения белков, сильно различающихся по массе, и для электрофокусирования.
На видео сначала показаны различия хроматографии при ламинарном и турбулентном потоках сольвента, а дальше как раз показан остроумный принцип двухколоночной хроматографии с 3-мя подвижными фазами.