Недавно задали вопрос: как оценить эффективность хроматографической системы при гель-проникающей хроматографии и что делать если эффективность, определяемая так же как и в паспорте, не соответствует (значительно ниже) заявленной.

Всем здравствуйте! Давно не брал я в руки "шашки", а тут что то "занесло" и, знаете, на такой ерунде, что решил написать.

Использование средств автоматизации в хроматографии, как и в любой другой прикладной области науки и техники, позволяет, зачастую, значительно улучшить как показатели самого, автоматизируемого процесса, так и общие производственные показатели лаборатории, цеха и т.д. Но cам процесс перехода на автоматизацию, даже, казалось бы, не значительную, требует как временных, так и материальных затрат, а иногда и привести к поломкам или выходу из строя.

Ввод пробы через петлю инжекторного клапана в жидклостной хроматографии применяется повсеместно и основан на использовании 7 портового 2-ходового клапана, который в положении "Загрузка" (Load) позволяет вводить пробу в петлю через инжекционный порт (например при помощи шприца) (Рис.1), а в положении "Ввод" (Inject) - включает петлю в тракт хроматографа, за счет чего происходит безопасный ввод пробы(Рис.2).

В аналитической хроматографии довольно широко распростраены методы, в которых используются хроматографические колонки с "мягкими" сорбентами. Это, в основном, сорбенты на основе сверхсшитых природных углеводных полимеров декстрана, агарозы и т.д., выпускаемые под марками Sepharose, Superdex, Sephadex и т.д.

Аналитическая гель-эксклюзивная хроматография (size exclusion chromatography) очень широко распространенный метод для качественного и колличественного анализа состава сложных смесей различного происхождения. Как известно гель-фильтрация основана на распределении молекул аналита по их размерам и принципиально отличается от всех остальных видов хроматографий тем, что аналит не сорбируется (не должен) на сорбенте, т.к. распределение молекул происходит во время их движения сквозь слой пористого сорбента.

У хроматографической колонки существует несколько параметров, которые желательно как контролировать при покупке, так и при подозрении на ее повреждение во время работы. Некоторые из них , такие как: "мертвый объем", качество и эффективность набивки хроматографической колонки - легко можно оценить по форме пика неудерживаемого в используемой хроматографической системе вещества, пропущенного через колонку.

Таким образом используемое вещество должно обладать несколькими важными свойствами:

1. Быть хорошо растворимым в подвижной фазе

2. Уверенно регистрироваться детектором

В настоящее время при разработке технологий и пилотном производстве фармпрепаратов на основе белков активно используется технология FPLC, основанная на использовании сорбентов, матрица, которых состоит из сверхсшитых полимеров природного или искусственного происхождения. Данные сорбенты за счет своей относительно жесткой и ажурной структуры создают очень низкое сопротивление даже вязким белковым растворам при высоких (зачастую более 300 см/час) и обладают очень высокой емкостью (от 20 до 100 и более мг белка/мл сорбента).

Однажды был какой-то на удивление дурацкий день: у меня 2 раза в моем присутствии при фильтрации забивался фильтр и мигом его срывало к чертовой матери, в результате чего ренатурат капал даже с потолка, еще у одного здорового парня вдруг кровь пошла носом ну и так по мелочи. А еще у одного хроматографиста метод, который он перенес уже на десяток с лишним хроматографов, по непонятным причинам ни как не хотел воспроизводиться на очередном ВЭЖХ-хроматографе.

Потребовалась новая колонка. Бабульку, которая набивала их 30 лет сократили. Дал набить девочкам- выходы пиков ровно в 2 раза быстрее получились. В общем при помощи Супины и всего ненормативного словарного запаса пришлось учиться самому.