Добро пожаловать


• Вход  • Регистрация
• Забыли пароль?

Обратная связь

О фирмах

Разделы

Сорбенты

Dionex или BioRad

Уважаемые коллеги!
Помогите, пожалуйста, определиться с выбором прибора. Задача - полупрепаративное выделение белка (IgG) из культуральной жидкости, при этом целью является именно получить продукт, а не оптимизировать метод. Объем, с коим предстоит работать "за раз" - 2-4 литра (объем среды в биореакторе). Методы - вероятнее всего, ионообменная и аффинная хроматография. Кроме того, предполагается "в далекой перспективе" решать задачи по выделению соединительнотканных белков.

На данный момент имеются предложения от Dionex на Ultimate 3000 (полупрепаративная градиентаня бинарная помпа 0.5-50 мл/мин, максимум давления 15 MPa) и от BioRad, на Biologic DuoFlow Pathfinder 80 (до 40 мл/мин, 6.6 MPa, возможность на одном приборе работать в 2 колонки). В хроматографии я разбираюсь, к сожалению, слабо - я культуральщик-клеточник, а не биохимик, поэтому прошу совета. Сейчас склоняюсь к Dionex, в силу достижения большего давления на большей скорости потока, а также хороших отзывов о качестве и программном обеспечении (в том числе, встреченных на данном сайте :).

С уважением, Я.

Василий's picture

Моноклональные

Моноклональные антитела достаточно распространенный продукт и есть несколько основных способов их очистки, но ни в одном из них я не встречал использования хроматографии высокого давления, так что Вы несколько не стой стороны подошли к решению вопроса, ориентируясь на давление. "Хрестоматийная" технология, как Вы абсолютно правильно отмечаете, включает в себя: аффинную хроматографию на сорбентах с иммобилизированным белком А или G - стадия захвата антител из культуральной жидкости (КЖ) и стадию очистки на ионообменном сорбенте (в основном на катионообменнике). Зачастую, в завершении дополнительно проводят доочистку, т.н. "polishing" методом гель-проникающей хроматографии от димеров антител, заодно меняя буфер на буфер ГЛФ. Иногда стадию очистки проводят методом не ионообменной, а гидрофобной хроматографии. Все данные методы не требуют использования высокого давления с сохранением высокой, требуемой в производстве, производительности. Все это достигается за счет использования сорбентов на основе как природных (Sepharose, Superdex и т.д.) или искусственных (Affi-Gel и т.д.) полимеров, имеющих высокую,10-20 и более мг на мл сорбент, емкость и низкое сопротивление потоку (рабочие потоки более 300 см/ч). Единственный их "недостаток" - то, что их предельное давление, зачастую, находится на уровне 3 атмосфер (0,3 МПа). Таким образом я считаю, что обращать внимание необходимо прежде всего на потоки, т.е. производительность насосов, а не на давление, которое выдерживает любой хроматограф. Требуемую производительность следует рассчитывать исходя из Ваших потребностей, отталкиваясь от самой продолжительной, лимитирующей стадии процесса. Такой стадией понятно, что  будет являться стадия "захвата" моноклональных антител из КЖ, во время которой необходимо пропустить весь материал через колонку за какое-то, определяемое Вами, время. Таким образом нам еще необходимо подобрать колонку необходимой емкости и пропускной способности.

Хорошим выходом со стадии культивирования считается 10 мг антител с литра КЖ, так что исходного материала, исходя из Ваших возможностей, будет примерно 20-40 мг. Емкость стандартных сорбентов с иммобилизованным белком А или G - 10-30 мг/мл сорбента. Таким образом объем колонки не должен превышать 5 мл. В настоящее время на рынке представлено большое количество колонок (картриджей), уже упакованных необходимым сорбентом в требуемом объеме (HiTrap column от GE, Bio-Scale Mini Cartridges от Bio-Rad и т.д.). Данные колонки позволяют работать при потоках до 10 мл/мин (до 480 см/ч). Таким образом выходит, что время нанесения 4 литров будет не менее 400 мин (6 ч.40 мин.). В принципе достаточно, чтобы провести первую стадию аффинной хроматографии за 8-ми часовой рабочий день, ну или, снизив скорость, поставить нанесение в ночь.

Таким образом для поставленных вами задач необходим хроматограф:

1. С рабочим давлением не ниже 2-3 атм

2. С рабочим потоком в пределах 2-10 мл/мин

3. С возможностью создавать градиент - для стадии очистки методом ИОХ или гидрофобной хроматографии

4. Коллектором фракций.

5. UV-детектором, желательно еще и кондуктометр.

Таких систем великое множество и достаточно дешевых, например BioLogic LP System от Bio-Rad. Сам я на них не работал, но по отзывам система достаточно надежная. Также могу посоветовать системы AKTA от GEhealthcare. Они, естественно, много дороже, но они очень удобные, тем более с очень хорошим нашим сервисом. Также есть множество промежуточных (по цене и производительности) систем, в том числе и от Dionex, о которых сказать ни чего не могу (на Dionex я работал только на аналитике), которые, вероятнее всего также с успехом справятся с поставленной задачей.

Вообщем я бы посоветовал заглянуть на перспективу и уже от нее отталкиваться. Например, может в скором времени будет закуплен более производительный реактор, литров на 10-20, тогда нужно сразу закупать систему с диапазоном скоростей от 1 до 100-200 мл/мин, которая покроет как сегодняшние потребности, так и ближайшего будущего.

Единственное пожелание: при разработке технологии ключевым является аналитическое сопровождение каждого этапа разработки, так что если нет, то обязательно купите аналитический хроматограф, очень желательно с автосемплером.

Всего наилучшего.

Matveichev A. V.'s picture

Благодарю за

Благодарю за детальный ответ. Выбор, на данный момент, сделан в пользу Dionex.

О пользователе




Настоящее имя Алексей

Пол мужской

Дата рождения 18/09/1980



Joined: 14/04/2012