БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ, вид относительной растворимости в каждой фазе): подвижной и неподвижной.">хроматографии

, основанный
на различии в скорости перемещения компонентов анализируемой смеси по бумаге
в потоке р-рителя (элюента). Хроматограммой в этом случае называют картину
расположения хроматографич. зон на бумаге после завершения разделения.
В бумажной хроматографии используется гл. обр. спец. хроматографич. бумага, к-рая должна быть
максимально однородной и содержать только целлюлозные волокна. Она может
служить неподвижной фазой или инертным носителем неподвижной фазы.
В распределительной бумажной хроматографии неподвижная фаза - адсорбированная бумагой вода
или неполярные орг. р-рители, к-рыми пропитывают бумагу (вариант с обращенными
фазами), а элюент - соотв. смеси орг. р-рителей с водой, часто содержащие
также к-ты, комплексообразующие и др. в-ва, или водные р-ры неорг. к-т
и солей. Скорость перемещения компонентов зависит от коэф. их распределения
между фазами и от соотношения объемов этих фаз.
В адсорбционной бумажной хроматографии разделение компонентов смеси происходит благодаря
различию в их сорбируемости адсорбентом - бумагой. В кач-ве элюента используются
гл. обр. смеси орг. р-рителей с водой.
В ионообменной бумажной хроматографии используют бумагу, пропитанную ионообменными смолами.
Скорость миграции компонентов в этом случае зависит гл. обр. от констант
ионного обмена и рН элюента.
Осадочная бумажная хроматография осуществляется на бумаге, импрегнированной р-ром реагента-осадителя,
образующего с разделяемыми в-вами малорастворимые соединения. Скорость
движения компонентов определяется произведениями р-римости этих соединений.
В лигандообменной бумажной хроматографии бумагу предварительно http://www.offshorefoundation.com/offshore-foundation-formation/ обрабатывают р-рами ионов
металлов, напр. Сu2+ при разделении аминов и аминокислот. При
этом компоненты перемещаются в зависимости от констант устойчивости их
комплексных соед. с ионами металлов.
На практике часто реализуются одновременно неск. механизмов разделения.
Бумажная хроматография осуществляется в стеклянных хроматографич. камерах или др. закрытых
сосудах. Для улучшения воспроизводимости их часто кондиционируют, покрывая
внутр. стенки фильтровальной бумагой, смоченной соответствующим р-рителем.
В камеру помещают лоток с элюентом, в к-рый опускают край хроматографич.
бумаги после нанесения на нее пробы разделяемых в-в (обычно объемом 1-10
мкл). Элюент движется под действием капиллярных и гравитац. сил. По расположению
бумаги и направлению тока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную
бумажную хроматографию. Хроматографирование можно проводить также в центробежном поле или в
условиях градиента т-ры, что увеличивает эффективность и скорость разделения.
В т. наз. двумерной бумажной хроматографии пробу наносят в один из углов квадратного листа
и после завершения хроматографирования в одном элюенте бумагу высушивают
и, повернув на 90°, погружают в др. элюент. На двумерной хроматограмме
получают до n2 хроматографич. зон, где и -число зон, образующихся
при обычной (одномерной) бумажной хроматографии.
После подъема р-рителя на определенную высоту бумагу вынимают из камеры,
высушивают и выявляют хроматографич. зоны. Если зоны не окрашены, хроматограмму
опрыскивают р-рами специфич. реагентов, образующих с компонентами разделяемой
смеси окрашенные или флуоресцирующие соединения. Используют также ферментативные
и биол. методы детектирования, напр., для выявления ферментов хроматограмму
обрабатывают р-ром соответствующих субстратов. Радиоактивные в-ва обнаруживают,
экспонируя хроматограмму на рентгеновскую пленку.
Положения хроматографич. зон в бумажной хроматографии характеризуют величиной Rf,
представляющей
собой отношение пути, пройденного центром хроматографич. зоны, к пути,
пройденному фронтом р-рителя: Rf= 1/[1 + (KdVs/Vm)],
где Кs и Vт- объемы соотв. неподвижной
и подвижной фаз, Кd-коэф. распределения в-ва между этими фазами.
Погрешность определения Rf ок. 5%. В стандартизованных
условиях эта величина постоянна для каждого в-ва и используется для его
идентификации.
Количеств. анализ проводят непосредственно на хрома-тограммах или после
отделения в-ва хроматографич. зон от целлюлозной основы. В первом случае
компоненты определяют с помощью сканирующей денситометрии, флуориметрии,
фотометрии или по размеру хроматографич. зон, а также активац. методами
(при использовании последних двух методов зоны предварительно вырезают).
Пределы обнаружения в-в в зонах по окрашенным производным составляют 0,1-10
мкг, флуориметрически -10-3-10-2 мкг, активационным
методом - 10-4-10-10 мкг. Отделение компонентов от
целлюлозной основы осуществляют экстрагированием, сжиганием бумаги или
кипячением ее в смеси к-т. Затем компоненты определяют любым подходящим
методом, обычно спектрофотометрическим, титриметрическим или кинетическим.
Погрешность количеств. анализа не превышает 10%.
С помощью бумажной хроматографии можно разделить и анализировать практически все классы
хим. соед., в т.ч. аминокислоты, сахара, стероиды. Кроме того, бумажная хроматография в сочетании
с двумерным электрофорезом используется как микропрепаративный метод разделения
природных в-в, в частности пептидов.
Достоинства бумажной хроматографии: возможность разделения малых кол-в (0,001-1 мкг) в-в,
высокая чувствительность, простота аппаратуры. Недостаток метода: сильное
размывание хроматографич. зон, связанное с неоднородностью бумаги. Вследствие
этого для разделения сложных смесей в-в необходимо использовать листы длиной
ок. 1 м, что приводит к увеличению длительности эксперимента (для двумерной
бумажной хроматографии до 15-20 ч) и большому расходу р-рителя.
=== Исп. литература для статьи «БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ»: Хроматография на бумаге, пер. с чеш., М., 1962; Лабораторное

руководство по хроматографическим и смежным методам, пер. с англ., т. 1,
М., 1982, с. 58-151. Б. Г. Беленький.

Страница «БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ» подготовлена по материалам химической энциклопедии.

О пользователе

Kreativka's picture
User offline. Last seen 1 year 41 weeks ago. Offline
Друг сайта



Настоящее имя Катя

Пол женский

Дата рождения 10/08/1987



Joined: 16/01/2012