Фантомное засушивание колонки

Проблема попадания воздуха в систему в жидкостной хроматографии достаточно часто возникает из-за множества причин, часть из них, а также примеры их устранения, приведена тут. Но недавно я столкнулся с тем, что воздуха в системе не наблюдается, а УФ-детектор «рисует» характерную картинку засушенной колонки (Рисунки 1 и 2 ).

Рисунок 1. Общий вид хроматограммы. В областях 1 и 2 как раз и наблюдается появление воздуха.

 

Рисунок 2. Увеличенная область 2 из рисунка 1. Хорошо заметно "нарастание " пика, что можно принять за начало элюции материала.

При этом я работал на хроматографе ÄKTApurifier UPC 100 при низких (до 6 мл/мин) потоках.  Ясно, что при таком «лесе» работать невозможно (рисунок 1 область 1), т.к. любой сигнал «забьется». Но проверив все шланги ни какого воздуха я не обнаружил и колонку только что новую, не засушенную гарантированно, поставил. Что делать - не понятно, т.к. работать невозможно. Но немного поразмыслив я пришел к следующему выводу: раз взяться воздуху не откуда, значит пузырек  почему-то сидит в ячейке и прыгает там. На ÄKTApurifier UPC стоят вертикальные ячейки (рисунок 3) и я подумал, что, вероятно, пузырь  не придавливается достаточно сильно к выходу из кюветы при малых потоках за счет Архимедовой силы.

Рисунок 3. Ячейка выделена рамкой

 

Попытался выгнать его потоком: резко увеличил поток - резко сбросил - опять увеличил, ни чего не помогает. Надо снимать колонку и как-то шприцом или еще чем пытаться пузырь оттуда выгнать. Вообщем муторно и не факт, что когда опять будешь подключать колонку воздух не появится опять. Но плюс ячейки в том, что она не жестко закреплена на приборе и с колонкой а только шлейфом и шлангом, соответственно. Вообщем решил я "обмануть" пузырь. Для этого пустил поток, отсоединил кронштейн ячейки от корпуса и перевернул ее. Как видите шум мгновенно пропал и работать стало можно.

Но уже поле нанесения материала, во время промывки опять стал появляться како-то нарастающий шум на UV (рисунок 2). Причем нарастал он постепенно и я чуть было не принял его за элюцию материала, т.к. уж больно он "по Гаусовски" начал расти:) (сравните с пиком материала - полная идентичность). Даже фракцию начал собирать. Но т.к. я уже пуганный, то для верности еще раз перевернул ячейку и все опять стало на свои места. Вообщем надо дегазировать лучше материал или быть готовым к сюрпризам.

Всем удачи.

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 29 weeks 3 days ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009