Что делать если на колонку попал воздух

Вопрос достаточно мало рассматриваемый в литературе, но тем не менее очень злободневный в жидкостной хроматографии. Так, например, за прошедший месяц я тем или иным образом сталкивался с этим раза 4. То клапан сработает с запозданием то сам напортачил. Засохшую колонку опять же полежавшую во время жары при +30 в «холодной» комнате пришлось восстанавливать. Работаю на хроматографе без ловушки, так что единичные пузыри бывает залетают.

Конечно самое правильное, это перенабить засушенную колонку. Ну а если там уже материал? Все псу под хвост? К сожалению у меня очень богатый опыт в этом вопросе. За время работы хроматографистом я засушил очень много колонок J с уже нанесенным материалом. Я «сушил» хелатные, ионообменные, обращеннофазные колонки с уже нанесенным белковым материалом. Всякий раз покрываюсь холодным потом, но каждый раз стратегия обычно бывает одна: промываешь колонку стартовым буфером до тех пор пока весь воздух с колонки не выйдет и UV не перестанет «плясать» и ведешь процесс дальше. Желательно при этом чтобы буфер был дегазирован и создать на колонке дополнительное давление (при повышенном давлении воздух быстрее растворяется). Разделение всегда было практически то же самое, что и на не засушенной колонке, ну иногда чуть хуже. Скорее всего это было из-за того, что я в основном работал на хроматографии низкого давления и с сорбентами марки Sepharose FF (ионообменная и никель хелатная хроматография). Хотя С18 Vydac тоже сушил и как-то особенного снижения эффективности не заметил. Возможно с сорбентами других марок такой фокус не проходит и его приходится менять, интересно было бы узнать После процесса, конечно, колонку лучше все таки перенабить, что с Sepharose FF я и делал, а вот С18 я просто промывал 100% изопропанола и немного поджимал, после чего проводил ацетоновый тест для контроля (уж больно тяжело ее перенабивать). Кстати на одном предприятии засушили 3 литровую колонку С18 YMC, причем без аксиального сжатия. Тоже сначала все опешили: «ЧТО ДЕЛАТЬ!?». Ну а делать – то не чего, все равно выкидывать, так что решили поэкспериментировать. Подали обратным потоком 100% дегазированный изопропанол на низкой скорости и выгнали воздух. Так вот после этого, как говорят, эффективность разделения даже повысилась! Повторять, конечно, ни кому не советую, но как вариант приведения колонки в чувство предлагаю.

Вообще, конечно, все это очень не весело т.к. минимум теряется уйма времени и нервов, так что с воздухом надо бороться обязательно. Особенно трудно бороться с одиночными пузырями, которые могут причинить значительно больше проблем чем большое количество воздуха. Так если у Вас используется колонка малого диаметра, то одиночный пузырь может запросто спрятаться под мембраной адаптера и у Вас ни когда не будет ламинарного потока, а вот это уже ПРОБЛЕМА, причем Вы даже не будете понимать ее причину, т.к. пузырь-то не виден, вроде все нормально, а по колонке все «мажется». И этот пузырь там может болтаться очень долго. Те же последствия может вызвать и пузырь прошедший мембрану адаптора, если он лежит на сорбенте. Пузырь просто промнет себе выемку и опять неравномерный поток плюс неравномерность забивки принесут массу головной боли.

Так что мои советы следующие:

  1. по возможности работать на дегазированных растворах;
  2. использовать воздушную ловушку перед колонкой (особенно эффективна именно против мелких пузырей);
  3. засушенную колонку, если возможно, промыть на медленной скорости нагретой градусов до 60, а потом дегазированной водой (при остывании на колонке вода будет усиленно поглащать воздух);
  4. ставить после колонки (а еще лучше после детектора) дополнительное сопротивление потоку, чтобы на выходе колонки тоже было давление.
  5. перед началом процесса прогонять на близкой к максимальной скорости все используемые растворы мимо колонки для удаления воздуха изо всех шлангов и «внутренностей» хроматографа;
  6. использовать входные шланги необходимого диаметра (шланги со слишком малым внутренним диаметром могут создавать сопротивление всасыванию, вызывающее разряжение из-за чего воздух сосется ото всюду).

Конечно, все эти пожелания не всегда исполнимы так, например, ловушка несколько размывает градиент, но если ее объем мал по сравнению с объемом колонки, то этим зачастую можно пренебречь зато вы гарантированно защищены от одиночных пузырей. Кстати, при хроматографии низкого давления ее очень удобно делать ловушку из шприца, даже объем можно менять! Один мой знакомый сам придумал.

Всем удачи!

Гость's picture

По-моему,

По-моему, попадание воздуха в колонку, проблема очень редкая. Это может произойти, если заглушки на снятую колонку не прикрутить. Насос закачать воздух в колонку не может, так как если воздуха мало, то он растворится в подвижной фазе, не дойдя до колонки, а если много, то головка насоса перестанет нагнетать.

Василий's picture

То что вы

То что вы написали абсолютно верно, но только для аналитических систем ВЭЖХ. Только следует ответить, что "если воздуха мало" то он растворится в тракте высокого давления, а вот после колонки, где давление резко падает, запузыриться этот воздух очень даже может, что приведет неадекватной работе детектора любого типа . Так что дегазировать фазы обязательно. Причем при использовании многокомпонентных фаз на основе растворителей данные компоненты следует дегазировать отдельно, и только затем их смешивать.
В препаративной же хроматографии данный вопрос стоит достаточно остро как в ВЭЖХ, так и низкого давления. Причем здесь цена такого "несчастного случая" очень высока.

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 37 weeks 5 days ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009