Добро пожаловать


• Вход  • Регистрация
• Забыли пароль?

Обратная связь

О фирмах

Разделы

Сорбенты

Передавливание сорбента при упаковке ВЭЖХ колонки

 

При самостоятельной упаковке сорбента следует избегать его передавливания. Так когда я работал на ВЭЖХ хроматографе, то однажды очередной упаковки обращено-фазного сорбента С18 в колонку я увидел, что давление повысилось. Я не обратил на это внимание, ацетоновый тест был нормальный и начал разделение. Но при элюции вместо привычной формы пика в виде гаусовской кривой (рисунок а) пик стал значительно ниже, шире и стал похож на холм с плоской вершиной (рисунок б).

 

При анализе полученных фракций было обнаружено, что фракции имеют меньшую концентрацию, что ожидаемо и терпимо, и чистоту, что, понятно, но неприемлемо, так как выход упал раза в1,5. Кратко: задница. Самое главное не понятно из-за чего: все (условия упаковки, хроматографии) остались прежние. Скорее всего, надо было перенабить колонку, но это так шаманство: а вдруг повезет. Но это плохо как для сорбента (его надо очень жестко отмывать иначе не раствориться), так и для процесса. Пришлось крепко думать. Т.к. первым признаком было повышение давления, то я подумал, что по какой-то причине сорбент оказался передавлен, может партия была плохая, или манометр неисправен. Рассуждая дальше решил, что при таком передавливании гранулы сорбента деформировались и его поры уменьшились, что затрудняет прохождение подвижной фазы – вот давление и наступило. При нанесении же белок в поры все-таки набивался, но при элюции в виду их деформации элюировался значительно медленнее, чем с поверхности, за счет чего и происходило уширение зон. Все вроде логично и колонку надо-таки перенабить, но очень не хочется гробить новый сорбент. Я тогда подумал, что если гранулы деформировались упруго, т.е. не раскрошились, то может получиться их разжать, чуть ослабив давление адаптора. Это можно было сделать опустив его немного, но была вероятность, что при опускании адаптора слой сорбента, предоставленный сам себе, может потерять целостность. Вообщем я поступил так: пустил поток через колонку и после того, как давление выровнялось открыл клапан гидравлического затвора. Таким образом адаптор пердоставленный сам себе стал по немногу опускаться под действием давления потока. При этом сорбент тоже был «придавлен» тем же потоком и деформироваться был не должен. Как только адаптор сместился где-то на 2-3 мм, то я опять закрыл клапан.

И о чудо, давление вернулось к норме. При хроматографии тоже все замечательно! Значит сорбент действительно был пережат, хорошо что обратимо, да и «загадить» я его не успел еще.

Так что выход был найден. В дальнейшем при упаковке я, конечно, делал давление меньше, но, видимо, от партии свойства сорбента значительно прыгают, так что этим способом я еще пару раз пользовался. Только оговорюсь, что эта процедура далеко не панацея и следует прибегать к ней только в крайних случаях, т.к. можно слишком отпустить адаптор и сорбент не будет совсем зажат и т.д.

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 2 years 16 weeks ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009