Как понять, что может хроматограф по его спецификации?

Недавно ко мне обратились с вопросом "разумно ли приобретать Bio-Rad`овскую BioLogic LP System с целью препаратива белков, как у неё с надежностью, расходниками, подтеканием, соответствует ли производительность заявленной?"
Ни про объемы ни про метод ни слова: простора для полета фантазии хоть отбавляй. Например можно с ходу ответить: не подходит - по произволу подразумевая, что препаратив это от килограмма :). Смешно, но надо как-то поконкретней.

К тому же, я ни когда не работал на системах этой фирмы и по этому конкретно по данной системе я сказать ни чего не смог: ни про протечки, ни про надежность. Один вариант: уповать на то, что фирма с именем и работать хроматограф будет достаточно надежно.
Главный минус: перистальтические насосы (нужны хорошие шланги, чтобы не перетирались и не зажевывались и все равно надо будет следить). Система низкого давления, так что если все фитинги нормально затянуты, то протечек быть не должно вообще.
Плюсы: простота, дешевизна, маленькая (можно поставить в холодильник).

Другое дело, что меня этот вопрос навел на мысль, что я сам не имею хоть каких-то формализированных критериев определения возможностей конкретной хроматографической системы по ее спецификациям.

Для простоты будем отталкиваться от конкретной системы BioLogic LP System и посмотрим на что она может способна. Ее характеристики, заявленные на сайте Диа-М:

Biologic LP – система низкого давления
Идеально подходит для очистки белков, ДНК. Biologic LP может работать в комплексе с препаративным электрофорезом.
• Компактная конструкция – возможно установить в холодном боксе (см. раздел «Холодильники»).
• Программируемый перистальтический насос, обеспечивающий функционирование системы в диапазоне скорости потока от 0,05 до 40 мл/мин.
• Клапаны, обеспечивающие ручную или автоматическую инжекцию пробы.
• Контроль одновременно за пятью буферными растворами.
• Градиентный смеситель.
• UV-оптический модуль для детектирования белков и нуклеиновых кислот при 254/280.
• Кондуктометрическая ячейка.
• Система комплектуется опционально коллекторомами фракций модели 2110 и BioFrac (опция).
• Biologic LP управляется с помощью уникального, простого в использовании программного обеспечения LP Data View 4.0.

  • Параметры Biologic LP
  • Скорость потока (max) 20 мл/мин, 2-х канальный перистальтический канал
  • Рабочее давление (max) 30 psi (0,2 МПа)
  • UV Детектор Фильтры 254/280 нм, 2 мм ячейка
  • Электропроводность Стандартный кондуктометрический монитор (1-500 mS/cm)
  • Составление градиентов Клапан SV-5
  • Ввод пробы Ручной MV-6 клапан
  • Коллектор фракций Модель 2110; BioFrac
  • Размеры 24 х 33 х 24 см
  • Масса, кг 19
  • Устойчивость к агрессивным средам Могут использоваться все хроматографические растворители.
  • Рабочая температура 4-40 ˚С

Отталкиваться, по-моему, следует от производительности насоса, обеспечиваемого перистальтическим насосом.  У нашего прибора, судя по спецификации, максимальный поток в градиенте составляет 20 мл/мин и 40 мл/мин в изократике. Отсюда следует, что такой хроматограф можно использовать для гель-хроиатографии  диаметром колонки до 100 мм.

Для хроматографического же разделения надо еще учитывать предельное давление хроматографической системы. К сожалению, по спецификации не ясно есть ли датчик, если нет, то надо манометр. По нему (30 psi, что для перистальтика, по моему, слишком, лучше выше 20-25 не подниматься) ясно, что это FPLC, причем при использовании сорбента типа Sepharose FF его слой не будет больше 50 см при разумной скорости.

Нагрузка. В связи с тем, что градиентная хроматография идет где-то 10-15 объемов колонки за 4-6 часов, то можно примерно прикинуть, что объем используемой колонки может быть около 720 мл (поток 20, 10 объемов). На максимуме скорости работать не рекомендую, так что скорее всего использовать или меньший объем или дольше вести хроматографию. Оптимальной стандартной аксиальной колонкой для таких условий, по-моему, является XK 50/30 - XK 50/60. По белку должна держать 10-20 г. Единственный минус, что такой объем нанести с этими насосами большая проблема: очень долго (даже если концентрация белка 1 г/л, то это 10-20 л. надо наносить). Так что, скорее всего, наносить надо либо другим насосом, либо ставить нанесение "на ночь", что для перистальтика опасно, т.к. может шланг протереться. Так что если хотим управиться за день, то для градиента надо использовать колонки меньшего диаметра (XK 26, например, при потоке 5-10 мл/мин) с пропорционально уменьшенной нагрузкой, или предварительно проводить концентрирование.

Как-то так. Если есть идеи другого подхода пишите обязательно, т.к. вопрос действительно важный.

Всем удачи и отличных праздников!

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 1 year 25 weeks ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009