Как увеличение ионной силы позволило сорбировать белок на ионообменном сорбенте

Как известно, при ионообменной хроматографии элюцию белков проводят градиентом pH или соли. Причем соль использовать удобнее, т.к. изменение рН может привести к:

  1. изменению емкости сорбента, особенно слабых ионообменников (КМ-, DEAE - sepharose);
  2. изменению свойств самого белка (заряда,  третичной и четвертичной структуры).

Таким образом основная стратегия ионной хроматографии: сажают белок в «низкой соли», снимают – ее градиентом.

Поэтому для лучшей «посадки» белка на хроматографическую колонку стараются уменьшить концентрацию соли в материале, идущем на ионообменную хроматографию. Достигается это разными способами, самым простым из которых является разбавление уравновешивающим буфером или просто водой.

Но недавно услышал следующую историю. Белок чистили из культуральной жидкости, из которой белок не садился, решили, что из-за высокой ионной силы. При попытках умеренно (в 1,5-2 раза) развести КЖ раствор мутнел, и белок не садился на сорбент напрочь. Посадить удавалось только при 5 и более кратном разведении и то не всегда. Причину нашли довольно быстро: в КЖ было очень много РНК, которая образовывала комплексы с белком (помутнение) и, видимо, экранировала заряд белка. Добавление РНКазы ситуацию немного улучшило, но разводить все равно надо было в 2-3 раза, да и к тому же используя РНКазу в производстве разоришься.

И тут был предложен очень неординарный выход: добавить КЖ еще соли! Предположение было следующим: катионы соли должны были, конкурируя с белком, перевести РНК в раствор, тем самым, препятствуя комплексообразованию. Возможно, механизм был другой, но цель была достигнута, и белок стал замечательно садиться на ионообменник прямо из КЖ.

 

Gunnasha's picture

Доработка

Здравствуйте, мне кажется, что внешний вид Вашего сайта можно немного улучшить путем добавления на сайт красивого блока с прокруткой, в котором будут отображаться фотографии либо текстовые публикации.

Дело в том, что не так давно мне пришлось разработать модули для своего сайта, которые позволяли бы легко добавлять подобный функционал. Разработка не заняла слишком много времени, а вот результат порадовал.

Мне не жалко поделиться своими разработками для хорошего дела.

Первый модуль (скачать можно здесь) предназначен для создания графической галереи, которая отображает указанное количество материалов с типом image (изображение). Здесь лежит страница с примером работы модуля.

Второй модуль (скачать можно здесь) предназначен для создания до трех текстовых галерей, которая отображает указанное количество текстовых материалов (можно указать термин определенный термин таксонометрии для осуществления выборки). Тут лежит страница с примером работы этого модуля.

Оба модуля могут работать одновременно, в чем Вы можете убедиться заглянув сюда.

Также я написал небольшую инструкцию по установке и настройке модулей. Надеюсь, что в ней достаточно информации.

Если у Вас будут какие-то вопросы по настройке модулей или разумная критика функционала - пожалуйста, пишите мне в обратную связь или на мыло - попробую помочь.

---
Мой сайт на друпале.

Василий's picture

Спасибо огромное!

Во-первых, спасибо за доброе слово, а во вторых за Ваше предложение. Вы, скорее всего правы, сайт действительно топорный. Но я что-то пока слабо представляю как это выглядеть будет :). Еще раз спасибо, мы обязательно обсудим с нашим програмистом (я не разбираюсь) и напишем Вам. Только заранее прошу прощения возможную за задержку, т.к. что-то времени в последнее время совсем нет.
Всего наилучшего!

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 1 year 51 weeks ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009