Его величество АЦЕТОНОВЫЙ ТЕСТ!

Колонка – сердце любого хроматографического процесса, т.к. вокруг нее все крутиться и если с ней что-нибудь не так, то и толку, ясное дело, не будет. Но как ее проконтролировать? Особенно если это колонка ВЭЖХ, тем более аналитическая. Они же все металлические, непрозрачные, а аналитические еще и неразборные (хотя некоторые умельцы вроде умудряются и их перпаковывать, но это полный бред!), так что колонка является в полном смысле этого слова «черным ящиком», о внутреннем состоянии которого мы можем судить только подавая на вход какие-то сигналы и интерпретировать полученные на выходе сигналы. Вообщем засада полная (кстати, с прозрачными тоже мороки навалом).

 Но не все так плохо! Светлые головы  каких-то неизвестных мне, но не становящихся от этого менее замечательными, хроматографистов, разработали уникальный по своей простоте и действенности метод, который является если и не панацей от всех проблем, но позволяет выяснить не только основные параметры колонки, но и, попутно, других блоков хроматографа.

Имя этому замечательному методу: «Ацетоновый тест».

(Это я так его называю, как и многие знакомые, может в литературе есть более правильное название, но я что-то не встречал.)

В общем виде данный метод заключается в следующем: на вход колонки подается (вкалывается) порция не взаимодействующего с неподвижной фазой вещества (назовем его А), но дающего сигнал на детекторе. Вот, в принципе, и все!

Что же за информацию можем получить столь аскетичным способом? Да очень многое! Главное уметь ей воспользоваться. Понятно, что вещество А, проходя через колонку, хотя и не взаимодействует с сорбентом, тем не менее, при прохождении через колонку за счет диффузии «расползается» и детектор регистрирует уже пик некой формы. Отсюда мы уже можем получить следующее:

1. Время выхода пика дает нам время выхода несорбирующегося вещества, которое позволяет, в свою очередь, рассчитать свободный объем хроматографической системы (для препаративной и промышленной хроматографии он практически равен объему колонки, а в аналитической надо еще учитывать и объем соединительных трубок).

Периодический контроль времени выхода позволяет, также судить о степени забитости колонки (чем меньше время, тем сильнее забита колонка)..

2. Форма пика у правильно запакованной колонки должна иметь вид распределения Гаусса (см. книгу в разделе Теория), если же она имеет отличия, то следовательно что-то с вашей колонкой что-то не так и дело не пойдет.

Пример 1: вместо 1 пика вышло 2 или более пиков, следовательно, у вас в колонке образовалась полость или несколько (из-за пузырька воздуха или сорбент неровно сел).

Пример 2: пик начинается с длинного плеча (интенсивность нарастает медленно), после чего резко вырастает: у вас в колонке свищ вдоль слоя сорбента и т.д.

3. Отсутствие сигнала: у вас не работает детектор!

4. Сигнал детектора (площадь пика, высота) на такое же количество А значительно ниже (выше) того, что он показывал во время последних калибровках: у вас барахлит детектор (лампа села, надо менять).

5. Серия из последовательных вколов одного и того же количества вещества А приводит к различным по площади пикам: у вас барахлит автосэмплер при данном объеме вкола. Надо вызывать мастера или изменить объем вкола (чаще надо его увеличить т.к. некоторые автосэмплеры имеют низкую точность при вколе малых объемов).

6. Серия из последовательных вколов одного и того же количества вещества А при различных соотношениях расходов насосов (при постоянном задаваемом общем потоке) приводит к различным временам выхода пика: у вас не откалиброваны или не исправны насосы.

Следует учесть, что приведенным коротеньким списком применения данного метода далеко не ограничиваются, просто надо иногда проявлять смекалку и инициативу.

Вернемся к названию. Ацетоновый тест потому так называется, что во многих хроматографических системах в качестве А используется именно ацетон: мало полярное, низкомолекулярное, растворимое в воде и многих растворителях во всех пропорциях, не заряженное вещество, отлично поглощающее на 280нм. Поэтому его можно с успехом применять в: обращено-фазовой, ионообменной, нормально-фазной (при повышенной полярности фаз), аффинной и других видах хроматографии.

Для гель-эксклюзивной хроматографии, скорее всего, могут быть использованы фракции белков, имеющих размер, больше размера пор сорбента.

Таким образом, используя только один метод мы можем проверить работу практически всех основных составляющих хроматографа, тем самым, избежав многих неприятных моментов.

Удачи!

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 16 weeks 1 day ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009