Определение витаминов

Исходные данные эксперимента
Использованное оборудование: 
Прибор: жидкостной хроматограф фирмы Varian в составе: автосемплер - ProStar 430; насосы – ProStar 210; UV-детектор – ProStar 325; Программа: Galaxie Chromatography Workstation версия 1.9.3.2.

Пробоподготовка при определении жирорастворимых витаминов в плазме крови.

 

В эппендорф берется 300 мкл. плазмы крови, смешивается с 300 мкл. этанола и 300 мкл. гексана.

Полученная смесь интенсивно встряхивается на вортексе в течение 1 мин., затем центрифугируется 3 мин. при 3000 об./мин. Супернатант отделяется. Операция повторяется не менее 3 раз.

Полученные гексановые вытяжки объединяются и упариваются в токе азота или под вакуумом при Т не более 400С.

Упаренный образец растворяется в 2х50 мкл. смеси хлороформ : метанол (1:1), переносится в конический эппендорф минимального объема и добавляется 150 мкл. подвижной фазы «А» (состав приведен ниже).

В случае выпадения осадка эппендорф центрифугируется при 1000 – 1500 об/мин. в течение 1 мин.

Супернатант переносится в стеклянную коническую вставку для виал объемом 200 мкл. и анализируется.

 

Условия хроматографирования жирорастворимых витаминов, выделенных из плазмы крови.

 

Колонка: RP С8, длина 250 мм, диаметр 4 мм.

Температура колонки: 350С.

Длины волн, nm:

Канал 1: 265, переключение на 292 с 13,4 мин.

Канал 2: 292, переключение на 450 с 10 мин.

Подвижная фаза:

«А» - раствор 100 ммол. ацетата аммония в смеси метанол : ацетонитрил (60:40).

«В» - раствор 100 ммол. ацетата аммония в воде.

      Градиент:

Подача, мл/мин

А,%

В,%

Общее время, мин.

1

70

30

3

1

88

12

7

1

100

0

12

1,25

100

0

18

Уравновешивание колонки – 20 мин.

Гость's picture

Добрый

Добрый день!Спасибо, очень полезная информация.Я не лаборант, но мне дали задание найти описание методик определения витаминов в крови методом ВЭЖХ. Буду очень признательна, если в ближайшее время смогу у вас найти такую информацию или ссылку на ее источник (в связи с отсутствием специализированного образования этот поиск уже отнял у меня уйму времени и принес пока очень скромнве плоды).Заранее благодарю.

Valeriy's picture

Определение витаминов.

Уважаемая гостья! Было бы неплохо, что бы вы написали поподробнее на каком приборе планируете работать (конфигурация), какими колонками располагаете. Потому что эту же методику я после Вариана переносил на старенький "Милихром-1" с колонкой КАХ-2 (Сепарон С18). Разделение получилось очень даже приличным, калибровок не делал, так как контора приказала долго жить, не успел :). Если же вас интересует материал для обзора, это другое дело. Но в любом случае подберем что нибудь.

Гость's picture

Здравствуйте

Здравствуйте еще раз!Проблема в том, что я вообще не собираюсь собственноручно этим заниматься (и никогда не занималась). Мой руководитель договаривается с  другой лабораторией о сотрудничестве. Чем они оснащены, я понятия не имею. Видимо, определять витамины им еще не приходилось, поэтому они просят методики. Более или менее подробное описание определения витаминов А, Е, В1, В2, В6 я нашла, с остальными сложнее...

Shurae's picture

Может, все-таки

Может, все-таки конкретизируете свой запрос:
- какие именно витамины?
- каким методом (только ГОСТированных вариантов есть как минимум парочка кроме хроматографии)?
- нужны ли вам какие-то официально аттестованные методики или по барабану?
Тогда будет существенно проще ответить на ваш вопрос :)

Гость's picture

Витамины

Витамины желательно хотябы основные, т.е. мне еще нужны методики для Д, К, С, В12. Аппаратуру обещали предоставить для ВЭЖХ (какую имеено, не знаю). Если есть более простые методики, за них я бы тоже была благодарно (возможно, мы смогли бы справиться силами своей лаборатории, не обращаясь в другое учреждение). Методики, конечно, желательно офицально аттестованные, но за неимением никакой информации, рассмотрю, как говорится, все предложения.

Shurae's picture

ГОСТы

ГОСТы - это максимально официально аттестованные методики :)
Витамин А (хоть вы его и не просили, но к основным он явно относится в отличие от ИМХО, витамина K): http://gost.ruscable.ru/cgi-bin/catalog/catalog.cgi?i=9695&l=
A, D, E: http://gost.ruscable.ru/cgi-bin/catalog/catalog.cgi?i=27803&l=
группа B (правда, без B12): http://gost.ruscable.ru/cgi-bin/catalog/catalog.cgi?i=27752&l=

Правда, есть "маленькая" проблемка - к определению в крови это все не имеет никакого отношения. Но по крови вы наверняка никаких официально аттестованных методик не найдете.
Только такого типа, как в начале топика приведены.

О пользователе

Василий's picture
User offline. Last seen 1 year 32 weeks ago. Offline
Администраторы



Настоящее имя Купцов Василий

Пол мужской

Дата рождения 28/01/1979

Мой сайт http://www.chromatogramma.ru/

Joined: 20/05/2009